CAS:485-47-2_氨基酸检测试剂茚三酮显色影响因素

      CΑS:485-47-2， 茚三酮，又名水合茚三酮，白色至淡黄色结晶粉末，熔点：250 ℃，分子式: C9H6O4，分子量: 178.1415。结构式如下，该产品信息均来源于苏州亚科化学，为苏州亚科化学优势产品。
       1901年，茚三酮被成功研制出来以后主要用于生物医学领域，1954年，瑞典科学家Oden和Hofsten将其应用于潜在汗液手印的显现。茚三酮与汗液中的氨基酸、多肽、蛋白质等发生反应，生成蓝紫色的手印纹线。
       1 茚三酮显色反应机理
       各种伯氨基酸的α-氨基酸和茚三酮反应都会得到相同结构的有色缩合物。
但这些机理并不包括反应的全过程，不能排除还有按其他方式反应的可能性。即使都是伯氨基的Α-氨基酸，结构的差异、反应机理也不完全相同。另外，有色缩合物不是单一的，反应中间产物也可能通过其他形式的缩合形成各种结构的有色物质。例如，紫红色的双-1，3-二酮茚就是通过被还原的中间体1，3-茚二酮之间缩合后得到的有色产物:
       2 茚三酮显色影响因素
       2.1 α-氨基酸浓度的影响
       α-氨基酸与茚三酮水溶液在所注条件下反应拥有较低显色浓度。随α-氨基酸浓度变大，显色逐渐变深。当浓度大于一定值时，所显颜色过深且其光密度值**出量程。当α-氨基酸浓度在两者之间时，颜色变化明显且显色较稳定，因此我们选定此浓度范围作为测定范围。
       2.2 pH值对显色反应的影响
       通过调节pH，可以使氨基酸与茚三酮反应颜色有明显的变化。pH值过高、过低都不发生显色。
       通过研究得知，中性氨基酸甘氨酸比酸性氨基酸以及碱性氨基酸赖氨酸在室温下显色都要快。
       在强酸性介质中，虽然能增强茚三酮或1，3-茚三酮羟基的反应能力，但却大大降低了参与缩合反应的氨基、羟基等新核基团的活性，使有色的缩合产物形成困难。
       在碱性条件下的显色反应，往往需加热才能完成，而且在离热后，还原型的有色缩合产物容易被空气中的氧或其他氧化物所氧化引起颜色变化甚至褪色，若加SnCl2可阻止溶解氧对有色物的氧化。
       2.3 温度及反应时间的影响
       研究表明，温度和反应时间对此显色反应的影响也很大。以谷氨酸为例，100Lg/mL的谷氨酸标准液在70℃进行显色发应时，发现即使加热30 min也基本无颜色变化。当温度为80℃时，加热30min以上有颜色变化，而当温度为90℃时，加热15 min左右即有明显的颜色变化，沸水加热时颜色变化也很明显。但考虑到蒸发的影响，所以实验选用90℃作为较佳反应温度。在显色反应中，反应时间主要根据具体的颜色变化而定。一般来说，当α-氨基酸浓度在变化范围之间，温度稍高，加热20min以上即可完全反应。时间太短，反应不完全，颜色梯度不明显，所以较佳反应时间在20-25 min。
       2. 4其它影响因素
       茚三酮的不同溶剂对显色反应也有影响。实验表明，茚三酮的丙酮溶液在80℃以上时显色较好，而茚三酮的水溶液要在90℃以上时显色才明显。茚三酮的用量对显色反应的影响不大，可选择5mL(或3mL)被测液与1mL(或0.5 mL)茚三酮溶液反应。测定时，根据待测的α-氨基酸的温度时间影响因素选择溶剂。
      此外，当被测样品中含有其它氨基酸时也可与茚三酮发生显色反应，从而影响测定结果。
结束语
       茚三酮比色法作为一种α-氨基酸的定量检测方法，具有操作简单、成本低的优点。只要控制好实验条件，就能取得较好的测量结果。这对于一般实验室的样品分析及味精生产厂家的α-氨基酸产品测定，有较好的实用价值。
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